《少女爱上姐姐》改编自同名恋爱冒险游戏，以“男扮女装进入女子学园”为核心设定，讲述镝木财阀独子宫小路瑞穗因祖父遗愿转入圣应女子学园的故事。他长相清秀、成绩优秀，却性格温和甚至有些弱气，为避免身份暴露，在青梅竹马玛利亚帮助下以女装姿态开始校园生活。作品围绕瑞穗与宿舍同伴、学生会成员及同班少女们的互动展开。他既要应对更衣、入浴、体检等可能揭穿身份的事件，也在文化祭、舞会、社团活动与日常相处中，逐渐成为众人信赖的“姐姐大人”。角色们各有鲜明性格，友情与朦胧恋慕交织，误会和笑料不断。动画保留原作轻松幽默的校园喜剧氛围，同时加入成长与自我认同的描写。瑞穗在隐藏秘密与真诚待人之间寻找平衡，最终收获珍贵羁绊。作品以华丽画风、声优演出和少女向校园气息吸引观众，是伪娘题材中具有代表性的动画之一。